JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 2:49 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) enthält, die von einem humanen Immundefizienzvirus oder einem HIV-infizierten Spender stammen.
PBMCs enthalten verschiedene Immunzellen, darunter HIV-infizierte CD4-positive T-Zellen mit integrierter proviraler DNA.
Besäen Sie die Vertiefungen mit einer Mischung aus Plasmodium falciparum, parasitierten Erythrozyten oder PfRBCs – die von Parasiten abgeleitete Antigene exprimieren – und nicht infizierten RBCs.
Während der Inkubation interagieren die Antigene der PfRBCs mit Rezeptoren von Immunzellen, aktivieren diese und setzen Zytokine frei.
Diese Zytokine lösen die nachgeschaltete Signalübertragung in CD4-T-Zellen aus und initiieren die Transkription der proviralen HIV-DNA und die Synthese neuer viraler RNAs.
Die viralen RNAs und HIV-Proteine bilden Viruspartikel, die abknospen, neue CD4-T-Zellen infizieren und die HIV-Infektion verbreiten.
Eine fortschreitende HIV-Infektion stört die Zytokinsekretion, beeinträchtigt die Immunantwort gegen PfRBCs und führt zu einer anhaltenden Malariainfektion.
Im Laufe der Zeit setzen infizierte Erythrozyten Parasiten frei, die in neue Erythrozyten eindringen, Malariaparasiten vermehren und das Zellkulturmodell für Malaria-HIV-Koinfektionen etablieren.
Um die Co-Infektionskulturen einzurichten, beginnen Sie mit der Aussaat von 1 x 106 frisch isolierten HIV-positiven und HIV-negativen PBMC in 100 Mikrolitern RPMI-S+ pro Vertiefung in eine 24-Well-Platte. Bringen Sie das Gesamtvolumen jeder Vertiefung mit 400 Mikrolitern RPMI-S+ auf bis zu 500 Mikroliter.
Fügen Sie dann in dreifacher Ausfertigung und in einem Gesamtvolumen von 500 Mikrolitern pro Vertiefung 3 x 106 nicht infizierte rote Blutkörperchen oder 3 x 106 parasitierte rote Blutkörperchen zu den HIV-infizierten und nicht infizierten Zellen hinzu. Legen Sie die Co-Infektionsplatte in einen Zellkultur-Inkubator.
Dann, nach dem entsprechenden Versuchszeitraum, pelletieren Sie die Zellen und sammeln Sie 700 Mikroliter Kulturüberstand aus jeder Vertiefung. Zentrifugieren Sie den Überstand, um Schmutz zu entfernen. Aliquotieren Sie dann die Proben nach Bedarf; Beschriften Sie die Röhrchen und frieren Sie sie für eine spätere Analyse bei minus 20 Grad Celsius oder darunter ein.