JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:37 Min. • July 8th, 2025
Während der Infektion setzen Alveolarmakrophagen Makrophagen-extrazelluläre Fallen oder METs frei, um Krankheitserreger zu eliminieren.
METs bestehen aus Chromatinfasern, die mit Peptidylarginin-Deiminasen, PADs, Matrix-Metalloproteinasen und citrullinierten Histonen komplexiert sind.
Um METs in Makrophagen aus bronchoalveolärer Lavageflüssigkeit sichtbar zu machen, zentrifugieren Sie zunächst die Flüssigkeit.
Plattieren Sie die resuspendierten Zellen auf Deckgläsern in Multi-Well-Platten-Wells.
Makrophagen heften sich an die Deckgläser, während andere Zellen in der Schwebe bleiben und verworfen werden.
Fixieren Sie die Makrophagen und bewahren Sie die Zellstruktur. Permeabilisieren Sie sie, um Zugang zu den zellulären Zielen zu erhalten.
Fügen Sie blockierende Proteine hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Ergänzen Sie mit einem primären Antikörpercocktail, der an citrullinierte Histone, PADs bzw. Matrix-Metalloproteinasen bindet.
Fügen Sie verschiedene Fluorophor-markierte Sekundärantikörper hinzu, die an Ziel-MET-Protein-gebundene Primärantikörper binden.
Mounten Sie die Zellen mit DAPI-haltigem Eindeckmedium. DAPI, ein Fluoreszenzfarbstoff, färbt die Chr
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos