JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 3:03 Min. • August 20th, 2025
Nehmen Sie eine Ratte, die zuvor mit einer Antigen-Adjuvans-Emulsion immunisiert wurde, die von der Tränendrüse stammende Autoantigene und fremde Antigene enthält.
Injizieren Sie die Emulsion erneut und injizieren Sie intraperitoneal Pertussis-Toxin, um eine maximale T-Zell-Aktivierung zu gewährleisten.
Aktivierte Zellen differenzieren sich in zirkulierende Effektor-Memory-T-Zellen, TEMs und geweberesidente Memory-T-Zellen, TRMs. Ein Prozentsatz der TRMs befindet sich im Gewebe der Augenoberfläche.
Nach einem definierten Intervall injizieren Sie die Antigene in die Forniceal-Subkonjunktiva und die Tränendrüsen, wodurch eine lokalisierte Entzündung ausgelöst wird.
Subkonjunktivale Antigen-präsentierende Zellen, APCs, präsentieren den TRMs Antigene und lösen so die Freisetzung von Zytokinen aus.
Zytokine veranlassen Bindehautepithelzellen, Chemokine freizusetzen, die TEMs rekrutieren.
APCs reaktivieren die infiltrierten TEM und lösen die proinflammatorische Zytokinfreisetzung aus.
Zytokine verursachen den Tod von Mucin-produzierenden Bindehautbecherzellen, senken den Muzinspiegel und verursachen eine Instabilität des Tränenfilms.
Zytokine induzieren den Zelltod der Tränendrüse – wodurch die Tränenproduktion reduziert wird – und stimulieren Hornhautepithelzellen, Matrix-Metalloproteinasen zu produzieren, die die Hornhaut schädigen.
Beurteilen Sie die Ratte auf die klinischen Merkmale, die auf eine erfolgreiche Induktion des trockenen Auges hinweisen.
Verteilen Sie am Tag Null 200 Mikroliter der Emulsion, die 1 Milligramm Tränendrüsenextrakt und 200 Mikrogramm Ovalbumin enthält, und vervollständigen Sie das Freund-Adjuvans in 1-Milliliter-Luer-Lock-Spritzen und bestücken Sie die Spritzen mit 27-Gauge-Nadeln.
Injizieren Sie die Emulsion ohne Anästhesie subkutan an der Basis der Rattenschwänze. Injizieren Sie dann am 14. Tag auf ähnliche Weise 200 Mikroliter desselben Antigens und unvollständiges Freund-Adjuvans. Am selben Tag injizieren Sie intraperitoneal 300 Nanogramm Pertussis-Toxin in 100 Mikroliter PBS.
Wiegen Sie am 48. Tag die erforderliche Menge Ovalbumin und lösen Sie es in PBS auf, kombinieren Sie dann Ovalbumin mit dem aufgetauten Tränendrüsenextrakt, der zuvor in diesem Video vorbereitet wurde, und stellen Sie eine Antigenlösung her, die 1 Milligramm pro Milliliter Ovalbumin und 1 Milligramm pro Milliliter Tränendrüsenextrakt enthält.
Nach der Betäubung der Ratten injizieren Sie 5 Mikroliter Antigen in die forniale Subkonjuktiva des Auges und injizieren Sie dann 20 Mikroliter Antigen in die Tränendrüse.