JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:53 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie zunächst ein Röhrchen mit Krebszellen in serumfreien Medien, um die Interferenz der Serumesterase während des Assays zu minimieren. Mit nicht fluoreszierendem Calcein AM-Farbstoff inkubieren.
Aktive intrazelluläre Esterasen hydrolysieren Calcein AM zu membranundurchlässigem fluoreszierendem Calcein-Farbstoff, der im Zytoplasma zurückgehalten wird.
Platten Calcein-gefärbte Krebszellen und Effektor-NK-Zellen in den Test-Wells, während die Kontroll-Wells nur calcein-gefärbte Krebszellen ohne NK-Zellen enthalten.
Die aktivierenden Zelloberflächenrezeptoren der NK-Zellen binden an aktivierende Liganden auf den Krebszellen und bilden eine Immunsynapse. Diese Bindung aktiviert die NK-Zell-Signalgebung und polarisiert die zytotoxischen Granula, die Perforine und Granzyme enthalten, zur Freisetzung in Richtung der Synapse.
Perforine bilden die Membranporen von Krebszellen, erleichtern den zellulären Eintritt von Granzymen und leiten die Apoptose ein. Die beeinträchtigte Membranintegrität führt zu einem Austritt von fluoreszierendem Calcein, wodurch die Fluoreszenz von Krebszellen reduziert wird.
Nehmen Sie Fluoreszenzbilder der Vertiefungen auf.
Eine geringere Anzahl fluoresziere
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