JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:29 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit der Zugabe von Chemolockstoffen, wie z. B. einem Chemokin, in eine Multiwell-Platte.
Setzen Sie eine durchlässige Kammer mit geeigneter Porengröße in die Vertiefung ein. Geben Sie die natürliche Killer- oder NK-Zellsuspension in die obere Kammer und inkubieren Sie.
Einige wenige Chemokinmoleküle diffundieren durch die Membran und binden an NK-Zellrezeptoren. Dies löst Signalwege aus, die Veränderungen des Zytoskeletts fördern, was zu einer gerichteten Zellbewegung in Richtung der höheren Chemotraktorenkonzentration in der unteren Kammer führt.
Nach der Inkubation wird ein festes Volumen migrierter Zellen aus der unteren Kammer in ein fluoreszenzaktiviertes Zellsortier- oder FACS-Röhrchen überführt. Fügen Sie eine vorgegebene Anzahl von fluoreszierenden Zählkügelchen hinzu und führen Sie eine FACS-basierte Zellzählung durch.
Bestimmen Sie anhand der folgenden Formel die absolute Anzahl der migrierten NK-Zellen in der Stichprobe.
Das Punktdiagramm gibt die Anzahl der Zählkügelchen und Zellen an, die als unterschiedliche Bereiche getrennt sind, basierend auf ihren Fluoreszenz- und Streueigenschaften.
Um die Migration von NK-Zellen als Reaktion auf chemotaktische Stimu
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