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Immunologie
0 Aufrufe • 5:36 Min. • July 8th, 2025
Efferozytose ist der Prozess, durch den phagozytische Zellen apoptotische Zellen beseitigen.
Um die Efferozytose zu analysieren, erhalten Sie Apoptose-empfindliche Maus-Thymozyten. Mit zellpermeablem CFSE-Farbstoff inkubieren.
Intrazelluläre Esterasen spalten CFSE an zellundurchlässigen Fluoreszenzfarbstoff und färben Thymozyten. Fügen Sie hitzeinaktiviertes Serum hinzu, um übermäßige Fleckenbildung zu vermeiden.
Plattieren Sie die gefärbten Thymozyten auf einer Kulturplatte. Fügen Sie Staurosporin hinzu, einen Proteinkinase-Inhibitor, der die kritische zelluläre Signalkaskade unterbricht und die Apoptose induziert. Darüber hinaus translozieren Phosphatidylserinreste in das äußere Segel der Zellmembran und fungieren als "Eat-me-Signale".
Erhöhen Sie die apoptotischen Thymozytenkonzentrationen zu Multi-Well-Plattenvertiefungen hinzufügen, die aktivierte Maus-Peritonealmakrophagen enthalten, die spezifische Rezeptor-Tyrosinkinasen exprimieren.
Diese Kinasen binden das exponierte Phosphatidylserin an apoptotische Thymozyten und erleichtern deren Internalisierung durch Makrophagen.
Nach der Inkubation frei schwebende apoptotische Thymozyten entfernen. Fügen Sie Fluorophor-markierte Ant
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