JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:35 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie virulente und weniger virulente Staphylococcus aureus-Stämme.
Fügen Sie Serum hinzu, um die Bakterien zu opsonisieren.
Übertragen Sie steigende Bakterienkonzentrationen in gekühlte Multi-Well-Plattenvertiefungen, die Neutrophile enthalten. Niedrige Temperaturen verhindern die Aktivierung von Neutrophilen.
Zentrifuge zur Erleichterung der synchronisierten Phagozytose.
Neutrophile Rezeptoren binden die Opsonine und lösen so die bakterielle Internalisierung in Phagosomen aus.
Bei virulenten Bakterien löst das phagosomale Milieu die Expression von zytolytischen Toxinen aus.
Diese Toxine bilden Poren, zerstören die Phagosomen und beeinträchtigen die Integrität der Neutrophilenmembran.
Die weniger virulenten Bakterien weisen jedoch eine verminderte zytolytische Toxinexpression auf.
Nach der Inkubation werden die Neutrophilen abgenommen und in Durchflusszytometerröhrchen mit dem fluoreszierenden Propidiumiodid (PI)-Farbstoff übertragen.
Der Farbstoff dringt mit geschädigten Membranen in die Neutrophilen ein und färbt die DNA.
Analysieren Sie die Neutrophilen mit einem Durchflusszytometer auf PI-Färbung.
Ein konzentrationsabhängiger Anstieg des Anteils von PI-positiven Neutrophi
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