JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 5:26 Min. • July 8th, 2025
Setzen Sie eine Maus Aerosoltröpfchen aus, die Mycobacterium tuberculosis enthalten.
Bakterien gelangen in das Lumen der Lungenbläschen – die winzigen Luftsäcke in der Lunge – in denen sich Makrophagen befinden.
Makrophagen-Mustererkennungsrezeptoren binden an die erregerassoziierten molekularen Muster auf den Bakterien und lösen deren Einbindung in ein Phagosom aus.
Verschlungene Bakterien sezernieren spezialisierte Proteine, die die Phagosomenmembran aufbrechen. Die Bakterien entweichen in das Zytoplasma und vermehren sich.
Betäuben Sie die Maus nach der Infektion. Intraperitoneal wird ein Reportersubstrat des bakteriellen β-Lactamase-Enzyms für die Fluoreszenz- oder REF-Bildgebung des Reporterenzyms verabreicht.
Das Substrat gelangt über den Blutkreislauf in die Lungenbläschen und gelangt in die infizierten Zellen.
Es dringt in die bakterielle Außenmembran ein und gelangt in den periplasmatischen Raum, der β-Lactamase enthält.
Das Substrat enthält einen β-Lactam-Ring, der ein Fluorochrom und einen Quencher verbindet. Aufgrund der Nähe wird die Fluoreszenz des Fluorochroms vom Quencher absorbiert.
β-Lactamase hydrolysiert den β-Lactam-Ring, setzt das Fluorophor frei und führt zu
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