JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:46 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die aus dem Knochenmark gewonnene Makrophagen auf Deckgläsern enthält.
Behandeln Sie die Makrophagen mit Leishmania promastigotes – dem infektiösen Stadium des Parasiten.
Während der Inkubation interagieren die Parasiten mit Makrophagen, was die Assemblierung von F-Aktin um die Interaktionsstelle herum erleichtert.
Makrophagen verschlingen die Parasiten in F-Aktin-umgebenen Phagosomen und bilden parasitophore Vakuolen oder PVs – eine replikative Nische.
Innerhalb von PVs setzen Parasiten Überlebensfaktoren frei, die die Ansammlung von F-Aktin um die Vakuolen erhöhen und ihre Fusion mit Lysosomen hemmen.
Darüber hinaus regulieren Parasiten die Produktion von Hepcidin – einem Makrophagenpeptidhormon, das die Eisenfreisetzung hemmt und den intrazellulären Eisenspiegel erhöht.
Der Eiseneinstrom in die Vakuolen fördert die Differenzierung der Promastigoten in pathogene Amastigoten und erleichtert deren Vermehrung, wodurch die Virulenz erhöht wird.
Nach der Inkubation waschen, um freie Parasiten zu entfernen, dann die infizierten Makrophagen fixieren und permeabilisieren.
Führen Sie einen Nukleinsäure-Fluoreszenzfarbstoff ein, um die Zellkerne in
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