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Immunologie
0 Aufrufe • 5:13 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit adhärenten Epithelzellen und behandeln Sie sie mit grün fluoreszierenden Protein-markierten Coxiella-Mutanten; einige mit Mutationen im Typ-IV-Sekretionssystem-Gen oder T4SS-Gen – entscheidend für die Replikation.
Replikative Mutanten interagieren mit Epithelzellen, lösen das Coxiella-Engulfment aus, bilden Coxiella-haltige Vakuole (CCV) und rekrutieren das Lysosomen-assoziierte Membranglykoprotein-1 oder LAMP1 an CCV.
Dies erleichtert die Sekretion von Effektorproteinen in das Zytoplasma der Zellen über das Typ-IV-Sekretionssystem und fördert so die bakterielle Replikation.
Mutanten mit T4SS-Genmutationen werden nicht repliziert.
Färben Sie die Zellen nach der Inkubation mit einem Fluoreszenzfarbstoff, fixieren Sie sie und permeabilisieren Sie die Zellmembran.
Einführung von LAMP1-spezifischen Primärantikörpern, die mit den LAMP1-Proteinen auf CCV interagieren.
Overlay mit rot-fluorophor-markierten Sekundärantikörpern, die mit primären Antikörpern interagieren, während Hoechst-Farbstoff die Zellkerne färbt.
Unter einem Epifluoreszenzmikroskop deuten rote Fluoreszenzvakuolen, die weniger grünes Coxiella in der Nähe des Zellkerns enthalten, auf
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