JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:19 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Suspension von aktiv wachsenden Porphyromonas gingivalis, anaeroben pathogenen Bakterien.
Fügen Sie BCECF-AM hinzu, einen nicht fluoreszierenden, zelldurchlässigen Farbstoff.
Aktive zytoplasmatische Esterasen hydrolysieren den Farbstoff in eine fluoreszierende, zellundurchlässige Form und färben die Bakterien.
Zentrifuge. Resuspendieren Sie die Bakterien in anaeroben Medien.
Geben Sie die markierten Bakterien in Multi-Well-Plattenvertiefungen, die Deckgläser mit anhaftenden menschlichen Endothelzellen enthalten.
In einer anaeroben Kammer inkubieren.
Die bakteriellen Fimbrien binden an die Oberflächenrezeptoren der Endothelzellen und setzen so intrazelluläre Signalkaskaden in Gang.
Dies führt zu einer Umlagerung von Aktinen und einer bakteriellen Internalisierung innerhalb der Phagosomen.
Waschen Sie die Deckgläser nach der Inkubation mit Puffer, um nicht internalisierte Bakterien zu entfernen.
Fixieren Sie die Zellen mit Paraformaldehyd, um die Zellstrukturen zu erhalten. Permeabilisieren Sie die Zellen mit einem nichtionischen Detergens, um Zugang zu intrazellulären Zielen zu erhalten.
Fügen Sie fluoreszenzmarkiertes Phalloidin hinzu, das an die Aktinfilamen
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