JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:18 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit adhärenten M1- und M2-Makrophagen-Subpopulationen, die sich durch ihre spezifischen Oberflächenmarker unterscheiden. Diese Zellen sind mit dem fluoreszenzmarkierten Mycobacterium tuberculosis infiziert.
Geben Sie FACS-Puffer in die Kulturvertiefungen.
EDTA im Puffer ermöglicht die Zellablösung aus den Kulturvertiefungen.
Übertragen Sie die Zellsuspension in Mikrozentrifugenröhrchen.
Zentrifugieren Sie die Röhrchen. Entsorgen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Zellen in einem Fluorochrom-konjugierten Anti-Makrophagen-Antikörper-Cocktail und einem Viabilitätsfarbstoff, Zombie-UV.
Der Zombie-UV-Fluoreszenzfarbstoff dringt durch geschädigte Membranen in tote Zellen ein und bindet an zytoplasmatische Proteine, wodurch eine klare Unterscheidung von lebensfähigen ungefärbten Zellen ermöglicht wird.
Darüber hinaus binden die fluoreszierend konjugierten Anti-Makrophagen-Antikörper an Zielantigene auf den Makrophagen, was einen unterschiedlichen Nachweis von Subpopulationen ermöglicht.
Waschen Sie die Zellen, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Zentrifuge. Entfernen Sie den Überstand.
Resuspendieren Sie die Zellen in einem Fixierpuffer, um Proteine zu vernetzen, d
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