JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 5:27 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Kultur von Krebszellen mit fluoreszenzmarkierten zytoplasmatischen Proteinen.
Fügen Sie zytokininduzierte Killer- oder CIK-Zellen hinzu – Effektor-T-Zellen mit natürlichen Killerzell-ähnlichen Eigenschaften – mit Anti-Tumor-Aktivität.
Natürliche Killergruppe 2, D- oder NKG2D-Rezeptoren auf den CIK-Zellen binden an stressinduzierbare Proteine auf den Krebszellen.
Die Bindung veranlasst CIK-Zellen, zytoplasmatische Körnertoxine – Perforine und Granzyme – freizusetzen.
Perforine bilden Poren in der Krebszellmembran und ermöglichen den Eintritt von Granzymen, die Caspasen aktivieren und die Apoptose induzieren.
Ernten Sie nach der Inkubation die Zellen. Fügen Sie einen fluoreszierenden Nukleinsäure-bindenden Zellviabilitätsfarbstoff hinzu.
Der Farbstoff dringt durch die geschädigte Zellmembran ein und bindet an die DNA, was zu doppelt gefärbten toten Zellen führt.
Mit einer intakten Zellmembran sind lebende Zellen undurchlässig für den Farbstoff.
Lassen Sie die Zellen durch ein Durchflusszytometer, um lebende Zellen mit einfacher Fluoreszenz und tote Zellen mit doppelter Fluoreszenz zu erkennen.
Erstellen Sie ein Streudiagramm, um den Prozentsatz toter Krebszellen zu me
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