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Immunologie
0 Aufrufe • 4:25 Min. • July 8th, 2025
In der Mikroumgebung des Krebses setzen aktivierte Neutrophile extrazelluläre Fallen (NETs) frei, die aus extrazellulären DNA-Fasern, Histonen und granularen Proteinen bestehen und eine entscheidende Rolle bei der Krebsprogression spielen.
Um die Adhäsion von Krebszellen und -NET in vitro zu untersuchen, fügen Sie NET-Suspension zu Multi-Well-Plattenvertiefungen hinzu. Inkubieren für die Bildung von NET-Monolagen.
Entfernen Sie nach der Inkubation nicht haftende NETs.
Fügen Sie eine Proteinlösung hinzu, um freie Bindungsstellen in den Vertiefungen zu blockieren.
Pipettieren Sie fluoreszenzmarkierte Krebszellen über NET-Monoschichten.
Spezifische Oberflächenrezeptoren auf Krebszellen interagieren mit NETs und erleichtern so die Zelladhäsion.
Nach der Inkubation das Medium aus der Vertiefung der Negativkontrolle verwerfen.
Fügen Sie Desoxyribonuklease hinzu, um NETs abzubauen und die Zellen abzulösen.
Entfernen Sie Lösungen aus der Negativkontrolle und testen Sie die Vertiefungen. Verwenden Sie Puffer, um nicht adhärente Zellen zu entfernen.
Fixieren Sie die anhaftenden Krebszellen mit Formaldehyd an NETs.
Visualisieren Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop die fluoreszierenden Krebszel
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