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Nehmen Sie eine anästhesierte Maus, die mit hitzeabgetötetem Mycobacterium tuberculosis (Mtb) vorimmunisiert ist, das eine Immunantwort auslöst und Mtb-spezifische T-Zellen erzeugt.
Verabreichen Sie Augentropfen zur Pupillenerweiterung, um die Lichtdurchdringung für eine verbesserte Augenbildgebung zu verbessern. Tragen Sie ein Gel auf, um eine Austrocknung der Hornhaut zu verhindern.
Wickeln Sie die Maus in Gaze, um die Körperwärme zu erhalten, und legen Sie sie in das optische Kohärenztomographie- oder OCT-System.
Bilde die Augen, um Schnittbilder der Vorderkammer einschließlich der Hornhaut und der Linse sowie der Hinterkammer einschließlich der Netzhaut zu erhalten.
Untersuchen, um sicherzustellen, dass keine Entzündungen vorliegen.
Injizieren Sie hitzezerstörtes Mtb in die Glaskörperhöhle. Das Immunogen breitet sich über das Auge aus und löst eine Immunantwort aus, die die Infiltration von vorgeformten Mtb-spezifischen T-Zellen und anderen Immunzellen induziert, was zu einer Entzündung führt, die als Uveitis bezeichnet wird.
Die OCT der Vorderkammer zeigt infiltrierte Immunzellen und ein Hornhautödem, während die OCT der Hinterkammer auf eine Glaskörperentzündung hinweist.
Bewerten Sie OCT-Bilder basierend auf dem Schweregrad der Entzündung, um das Fortschreiten der Uveitis zu quantifizieren.
Nachdem Sie die Maus betäubt haben, erweitern Sie die Pupille mit einem Tropfen 2,5 % Phenylephrin, um zu vermeiden, dass überschüssige Tröpfchen in die Nase oder den Mund gelangen. Nach zwei bis drei Minuten tupfen Sie die überschüssige Flüssigkeit ab und bedecken Sie das Auge mit 0,3 % Hypromellose-Gel. Wickeln Sie die Maus dann in eine Schicht chirurgische Gaze, um die Körperwärme zu erhalten, platzieren Sie die Maus dann auf der Tierkassette und positionieren Sie den Kopf mit der Beißstange.
Um die Bilder der optischen Kohärenztomographie oder des OCT-Bildes zu erfassen, schalten Sie das OCT-Bildgebungssystem ein und öffnen Sie die Bildgebungssoftware. Bringen Sie bei der Bildgebung der Hinterkammer das OCT nahe an die Augenoberfläche und achten Sie darauf, dass die Oberfläche der Linse nicht mit dem Auge in Berührung kommt.
Sobald das Auge richtig positioniert ist, stoppen Sie den Schnellscan, wählen Sie das Volumenscan-Protokoll und aktivieren Sie den Scan mit der Option Zielen. Bei Bildern des hinteren Augenabschnitts ist die Einstellung so lange vorzunehmen, bis der Sehnerv im horizontalen B-Scan-Ausrichtungsbild zentriert ist und die Netzhaut mit der vertikalen Ausrichtungsachse ausgerichtet ist. Passen Sie bei Bildern des vorderen Segments die Position so an, dass die Spitze der Hornhaut sowohl im horizontalen als auch im vertikalen B-Scan-Ausrichtungsbild zentriert ist. Klicken Sie abschließend auf Snapshot, um das Volume-Scan-Image zu erfassen. Klicken Sie dann auf Speichern.