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Immunologie
0 Aufrufe • 3:40 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie Leukämiezellen in Wachstumsmedien ohne stimulierende Faktoren wie Zytokine und inkubieren Sie sie.
Das Fehlen von stimulierenden Faktoren ermöglicht eine Dephosphorylierung intrazellulärer phosphorylierter Proteine und die Rückkehr in ihren ursprünglichen Zustand.
Zentrifugieren und das Medium entfernen. Resuspendieren Sie Zellen in einem Stroma-Überstand, der das Zytokin, das thymusische Stroma-Lymphopoietin oder TSLP enthält.
TSLP bindet an seinen Rezeptor auf der Leukämiezelle und löst so die Rezeptordimerisierung aus.
Dies bringt die beiden Janus-assoziierten Kinasen (JAKs) näher zusammen, was die gegenseitige Transphosphorylierung erleichtert.
Die aktivierten JAKs phosphorylieren die zytoplasmatischen Schwänze des Rezeptors und schaffen Andockstellen für den Signalwandler und Aktivator der Transkription, die STAT-Monomere.
Nach der Phosphorylierung dimerisieren sich STATs und lösen sich vom Rezeptor, um nachgelagerte zelluläre Prozesse zu regulieren.
Fixieren Sie die Zellen, um die Phosphorylierungszustände intrazellulärer Proteine aufrechtzuerhalten.
Behandeln Sie die Zellen mit einer Permeabilisierungslösung, um die Durchlässigkeit der Zellmembran zu erhöhen.
Füge
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