JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:43 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie ein Röhrchen mit frisch entnommenem menschlichem Blut und fügen Sie einen Lysepuffer hinzu.
Das Detergens im Puffer permeabilisiert die Zellmembran, lysiert die Zellen und setzt intrazelluläre Nukleinsäuren (NAs) und Nukleasen frei.
Chaotrope Wirkstoffe im Puffer denaturieren Nukleasen und verhindern so den Abbau von NA
.Fügen Sie magnetische Glaspartikel oder MGPs – siliziumbeschichtete magnetische Partikel – hinzu und mischen Sie sie gründlich.
Der niedrige pH-Wert des Puffers protoniert Siliziumdioxid, wodurch eine positive Ladung auf der Oberfläche der MGPs entsteht.
Negativ geladene NAs binden elektrostatisch an die geladene Oberfläche und bilden einen NA-MGP-Komplex.
Unter einem Magnetfeld sammeln sich NA-MGP-Komplexe an der Seite der Röhre.
Entsorgen Sie den Überstand, der Zelltrümmer und Proteine enthält.
Führen Sie mehrere Waschschritte durch, indem Sie die NA-MGP-Komplexe in einem Waschpuffer resuspendieren, ein Magnetfeld anlegen, um die Komplexe aufzufangen, und den Überstand mit den verbleibenden Verunreinigungen verwerfen.
Resuspendieren Sie Komplexe in einem Elutionspuffer. Der hohe pH-Wert unterbricht die NA-MGP-Wechselwirkung und setzt die NAs frei. Die
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos