Super-Resolution-Bildgebung der immunologischen Synapsenbildung von NK-Zellen auf einer gestützten Lipiddoppelschicht

Bereiten Sie einen Kammerobjektträger mit einer gestützten Lipiddoppelschicht (SLB) vor, die aus Phospholipiden und biotinylierten Phospholipiden besteht.

Fügen Sie blockierende Proteine hinzu, um unspezifische Wechselwirkungen zu verhindern.

Führen Sie Streptavidin ein, das an die biotinylierten Phospholipide bindet.

Fügen Sie biotinylierte, fluoreszenzmarkierte Anti-CD16-Antikörper hinzu, die an das immobilisierte Streptavidin binden.

Pipettieren Sie D-Biotin, um eine unspezifische Bindung von Streptavidin an die Zellen zu verhindern.

Führen Sie natürliche Killerzellen oder NK-Zellen ein. Die CD16-Rezeptoren auf diesen Zellen binden spezifisch an SLB-gebundene Anti-CD16-Antikörper und bilden eine immunologische Synapse.

Diese Bindung löst eine Aktin-Umlagerung und Mikrotubuli-Polarisation aus, wodurch sich schließlich Mikrocluster im Synapsenzentrum bilden, die SLB-gebundene Anti-CD16-Antikörper und CD16-Rezeptoren enthalten.

Perforinhaltige lytische Granulate polarisieren und dringen durch Aktinfilamente an der Synapse ein.

Fixieren Sie die Zellen. Permeabilisieren Sie die Membranen und SLB.

Fügen Sie fluoreszenzmarkierte Phalloidin- und Anti-Perforin-Antikörper hinzu, die an Ak