Ein Assay zur Messung der chemisch induzierten Zytotoxizität in präzisionsgeschnittenen Lungenscheiben von Menschen

Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit menschlichen, präzisionsgeschnittenen Lungenschnitten, die die native Lungenmikroarchitektur beibehalten

.

Entfernen von Medien. Steigende Prüfmittelkonzentrationen in die Vertiefungen geben und inkubieren.

Abhängig von seinem zytotoxischen Potenzial stört das Testmittel die Zellmembranen, induziert den Zelltod und reduziert lebensfähige Zellen in den Schnitten.

Nach der Inkubation Medien entfernen. Tauchen Sie die Scheiben in Medien, die wasserlösliches Tetrazoliumsalz (WST-1) und ein Elektronenkupplungsreagenz enthalten.

ausbrüten. In stoffwechselaktiven Zellen überträgt das Elektronentransportsystem der Plasmamembran Elektronen vom intrazellulären NADH auf das extrazelluläre Elektronenkupplungsreagenz, wodurch der zellundurchlässige Farbstoff WST-1 zu stabilem, dunkelgelbem, wasserlöslichem Formazan reduziert wird.

Schütteln Sie die Platte nach der Inkubation, um das Formazan gleichmäßig zu verteilen, und geben Sie es auf eine Multi-Well-Platte.

Messen Sie mit einem Mikroplatten-Reader die Absorption von Formazan, die auf die Lebensfähigkeit des Gewebes hinweist.

Eine Abnahme der Formazan-Absorption, abhängig von der Konzentration des Prüfmit