JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 2:40 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit der Zugabe eines immunmodulatorischen pharmakologischen Wirkstoffs zu unreifen dendritischen Zellen (DCs).
DCs exprimieren den Haupthistokompatibilitätskomplex oder MHC-Klasse-II-Molekül und co-stimulatorische Moleküle, die für die Förderung der T-Zellproliferation während der Immunantwort entscheidend sind.
Das immunmodulatorische Mittel greift mit dem DC in Kontakt und löst die Herunterregulierung der Expression von MHC-Klasse-II- und co-stimulatorischen Molekülen aus, wodurch das DC in eine tolerogene dendritische Zelle oder TolDC umgewandelt wird.
Co-Kultur von TolDCs mit naiven CD4+ T-Zellen.
Fügen Sie der Co-Kultur ein antigenes Peptid hinzu.
TolDCs internalisieren das Peptid, verarbeiten und laden anschließend das resultierende Antigen auf das MHC-Molekül.
Das antigengebundene MHC-Molekül transloziert zur Zellmembran.
Naive CD4+ T-Zellen interagieren direkt mit dem Antigen-MHC-Komplex auf TolDCs.
Die Interaktion mit dem co-stimulatorischen Molekül auf dem reifen DC ermöglicht die vollständige Aktivierung der naiven T-Zelle.
Ohne Co-Stimulation bleibt die naive CD4+ T-Zelle inaktiv und kann keine Immunantwort gegen das vorgestellte Antigen initiieren.
Resuspendieren Sie die Zellen in einer Konzentration von 2 x 105 dendritischen Zellen pro Milliliter und behandeln Sie sie 1 Stunde lang bei 37 Grad Celsius mit der entsprechenden experimentellen Konzentration des interessierenden Triterpenoids.
Während des letzten Drittels der Inkubation resuspendieren Sie die T-Zellen bei einer Konzentration von 1 x 10 7 Zellen pro Milliliter und 1 mikromolare CFSE für 15 Minuten bei 37 Grad Celsius. Waschen Sie dann die Zellen mit PBS und stellen Sie das Volumen auf eine Endkonzentration von 2 x 106 T-Zellen pro Milliliter ein.
100 Mikroliter der behandelten dendritischen Zellen werden mit 100 Mikrolitern der CFSE-markierten CD4 CD4-positiven T-Zellen in jeder Vertiefung einer 96-Well-Platte co-kultiviert und 100 Nanogramm pro Milliliter des OVA-Peptids 322-329 zu den Zellen hinzugefügt, wobei die CFSE-Intensität der T-Zellen durch Durchflusszytometrie nach 2 bis 3 Tagen Inkubation gemessen wird.