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Immunologie
0 Aufrufe • 3:54 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie Splenozyten, die von roten Blutkörperchen erschöpft sind, in einem Puffer ein, der einen zellpermeierten Kalzium-empfindlichen Fluoreszenzfarbstoff, Indo-1 AM, enthält.
Intrazelluläre Esterasen spalten Indo-1 AM in membranundurchlässiges Indo-1, das an Kalziumionen bindet und das Fluoreszenzsignal von Indo-1 von blau nach violett verändert.
Einführung von Fluorophor-konjugierten antigenspezifischen Antikörpern, die spezifisch an die jeweiligen Antigene auf Zellen binden.
Identifizieren Sie mit Hilfe der Durchflusszytometrie fluorophormarkierte B-Zellen und messen Sie ihr Indo-1-Violett-Blau-Fluoreszenzverhältnis.
Behandeln Sie nun die Zellen mit antigenen Liposomen, die aus IgM-Fab-Fragmenten bestehen, die an Liposomen-Doppelschichten konjugiert sind.
Die B-Zell-Rezeptoren binden an die Liposomen-gekoppelten Antigene, aktivieren die zugehörigen zytoplasmatischen Tyrosinkinasen und lösen die Aktivierung der Phospholipase-C-gamma-2-Aktivierung aus.
Aktivierte Phospholipase C spaltet das Membranphospholipid Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphat und erzeugt zweite Botenstoffe, einschließlich Inositol 1,4,5-trisphosphat oder IP3.
IP3 bindet an IP3-gesteuerte Kalziumkanäle auf
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