JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:49 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine großvolumige Zentrifugalfiltervorrichtung, die vertikal regenerierte Zellulosemembranen einer geeigneten Porengröße enthält.
Puffer und Zentrifuge hinzufügen. Entfernen Sie den Durchfluss, der das Membranfeuchthaltemittel enthält.
Beladen Sie das Gerät mit Bakterienkultur-Filtratprotein (CFP), das lösliche Proteine und extrazelluläre Vesikel (EVs) umfasst – nanoskalige lipidgebundene Strukturen, die von Bakterien sezernierte Biomoleküle enthalten.
Während der Zentrifugation gelangt CFP über die Zentrifugalkraft tangential durch die Membranen.
Biomoleküle, die kleiner als die Poren der Membran sind, werden mit der Kulturflüssigkeit durchdrungen, während größere, wie z. B. EVs, über die Membranoberfläche gelangen, wodurch die Verstopfung der Membran minimiert wird.
Der Filter konzentriert das CFP auf ein minimales Gerätevolumen, unterstützt durch sein Dead-Stop-Volumen, um ein Austrocknen der Biomoleküle zu verhindern.
Puffer und Zentrifuge hinzufügen.
Der Puffer ersetzt restliche Medienkomponenten, wodurch eine isotonische Umgebung für CFK-Biomoleküle geschaffen und ihre Integrität erhalten bleibt.
Setzen Sie den Konzentratbecher auf den Filterbecher, drehen Sie ihn
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