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Immunologie
0 Aufrufe • 2:24 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Zebrafischlarve, die mit Pilzsporen in den Hinterhirnventrikel injiziert wurde.
Makrophagen werden an die Injektionsstelle rekrutiert und bilden einen dichten Cluster um die Sporen.
Die Sporen werden von Makrophagen phagozytär verschlungen.
Diese Sporen haben die Fähigkeit, dem Abbau im Inneren des Phagosoms zu widerstehen, was es ihnen ermöglicht, zu Hyphen zu keimen und den nekrotischen Zelltod der Makrophagen zu induzieren.
Die Hyphen besitzen freigelegte pathogenassoziierte molekulare Muster (PAMPs) auf ihrer Oberfläche.
Neutrophile, die an den Infektionsort rekrutiert werden, erkennen und binden PAMPs. Der Kontakt mit Neutrophilen löst in Hyphen einen komplexen hyperverzweigten Phänotyp aus, wodurch deren Verschlung durch Neutrophile verhindert und die Immunevasion erleichtert wird.
Homogenisieren Sie die Larve und setzen Sie die lebensfähigen Pilzsporen und Hyphen frei. Zentrifugieren Sie, um Zelltrümmer zu entfernen, und plattieren Sie den Überstand auf einem Wachstumsmedium.
Zählen Sie nach der Inkubation die pilzkoloniebildenden Einheiten oder KBE.
Die KBE-Zahl stellt die Anzahl der lebensfähigen Pilzsporen dar, die sich der Immunabwehr des Wirts entzogen haben.
Unmittelbar nach der Injektion werden acht der Larven in einzelne 1,7-Milliliter-Röhrchen überführt und eingeschläfert. Bereiten Sie 1 Milliliter PBS mit Ampicillin und Kanamycin vor. Entferne so viel Flüssigkeit wie möglich aus den Röhrchen mit den Larven. Fügen Sie dann 90 Mikroliter des PBS mit Antibiotika hinzu.
Homogenisieren Sie die Larven in einem Gewebelyser bei 1.800 Schwingungen pro Minute für 6 Minuten. Schleudere sie dann 30 Sekunden lang mit 17.000 g nach unten. Pipettieren Sie die homogenisierte Suspension aus jedem Röhrchen in die Mitte einer beschrifteten GMM-Platte und verteilen Sie sie mit einem L-förmigen Einweg-Spreizer, wobei darauf zu achten ist, dass es sich nicht gegen den Rand ausbreitet. Inkubieren Sie die Platten kopfüber bei 37 Grad Celsius für 2 bis 3 Tage. Zählen Sie dann die Anzahl der gebildeten Völker.