Eine Technik zur Quantifizierung von Pilzinfektionen bei Zebrafischlarven
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:24 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Zebrafischlarve, die mit Pilzsporen in den Hinterhirnventrikel injiziert wurde.
Makrophagen werden an die Injektionsstelle rekrutiert und bilden einen dichten Cluster um die Sporen.
Die Sporen werden von Makrophagen phagozytär verschlungen.
Diese Sporen haben die Fähigkeit, dem Abbau im Inneren des Phagosoms zu widerstehen, was es ihnen ermöglicht, zu Hyphen zu keimen und den nekrotischen Zelltod der Makrophagen zu induzieren.
Die Hyphen besitzen freigelegte pathogenassoziierte molekulare Muster (PAMPs) auf ihrer Oberfläche.
Neutrophile, die an den Infektionsort rekrutiert werden, erkennen und binden PAMPs. Der Kontakt mit Neutrophilen löst in Hyphen einen komplexen hyperverzweigten Phänotyp aus, wodurch deren Verschlung durch Neutrophile verhindert und die Immunevasion erleichtert wird.
Homogenisieren Sie die Larve und setzen Sie die lebensfähigen Pilzsporen und Hyphen frei. Zentrifugieren Sie, um Zelltrümmer zu entfernen, und plattieren Sie den Überstand auf einem Wachstumsmedium.
Zählen Sie nach der Inkubation die pilzkoloniebildenden Einheiten oder KBE.
Die KBE-Zahl stellt die Anzahl der lebensfähigen Pilzsporen dar, die sich der Immunabwehr des Wirts entzogen h
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