Eine in vivo Immunfluoreszenz-Lokalisierungsmethode zur Untersuchung der Antikörper-Biodistribution
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 6:15 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie ein Mausmodell von Brustkrebs. Zu den Brustdrüsentumoren gehören Krebszellen, krebsassoziierte Fibroblasten, Adipozyten, Immunzellen und Tumorgefäße.
Intravenöse Injektion von Fluorophor-konjugierten tumorspezifischen Antikörpern.
Beim Erreichen des Tumorgefäßsystems binden Antikörper an tumorspezifische Transmembranproteine auf dem Gefäßendothel und nahe gelegenen Krebszellen.
Isolieren Sie die Brustdrüse chirurgisch und tauchen Sie sie in ein Gefriermedium.
Entnehmen Sie Kryo-Schnitte auf einem Objektträger und spülen Sie sie mit einem Puffer ab, um das Gefriermedium zu entfernen.
Fixieren Sie die Abschnitte, um die Gewebearchitektur zu erhalten. Tragen Sie ein Detergens auf, um die Immunfärbung zu verbessern, und eine Blockierungslösung, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Einführung eines Primärantikörpers, der spezifisch für Adhäsionsmoleküle auf dem Blutgefäßendothel ist, und eines Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpers, der an den Primärantikörper bindet und das Gefäßsystem markiert.
Fügen Sie ein Montagemedium auf der Folie hinzu und platzieren Sie ein Deckglas.
Beurteilen Sie unter einem konfokalen Mikroskop die Bioverteilung von tumorspe
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