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Immunologie
0 Aufrufe • 4:34 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit adhärenten Osteosarkomzellen auf Deckgläsern.
Diese Knochenkrebszellen werden mit einer stressauslösenden Chemikalie vorbehandelt, was zur Bildung von Stressgranula führt.
Stressgranula sind zytoplasmatische membranlose Organellen, die nicht-translatierende mRNAs, kleine ribosomale Untereinheiten, RNA-bindende Proteine oder RBPs, translationsbezogene Faktoren und Signalproteine umfassen.
Entsorgen Sie das Medium und waschen Sie die Zellen mit Puffer. Fixieren Sie die Zellen, um die zelluläre Morphologie zu erhalten.
Permeabilisieren Sie die Zellen, um intrazelluläre Ziele zu erreichen. Fügen Sie blockierende Proteine hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Einführung von primären Antikörpern, die an spezifische RBPs und translationsbezogene Faktoren innerhalb von Stressgranula binden.
Inkubieren Sie mit verschiedenen Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern und Hoechst-Farbstoff.
Sekundärantikörper binden an Primärantikörper, die an die Stressgranula-assoziierten Proteine gebunden sind, während Hoechst-Moleküle die DNA färben.
Montieren Sie die zellhaltigen Deckgläser mit Eindeckmitteln.
Beobachten Sie die Zellen mit einem
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