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Immunologie
0 Aufrufe • 4:59 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit Röhrchen mit menschlichem Vollblut, einschließlich roter Blutkörperchen oder Erythrozyten, und weißer Blutkörperchen oder Leukozyten wie Monozyten und Granulozyten und anderer Blutzellen.
Geben Sie Dihydroethidium – einen Superoxid-Indikator und unmarkierte Bakterien in ein Röhrchen. Behandeln Sie das andere Röhrchen mit grün fluorophormarkierten Bakterien.
Granulozyten und Monozyten interagieren mit den Erreger-assoziierten Molekülen der Bakterien und hüllen sie in Phagosomen ein.
Dadurch wird das phagosomale Membranenzym NADPH-Oxidase aktiviert, wodurch der molekulare Sauerstoff zu einem Superoxid-Anion reduziert wird.
Das Superoxid-Anion produziert außerdem Wasserstoffperoxid – eine reaktive Sauerstoffspezies (ROS), die zu einem oxidativen Ausbruch führt.
Innerhalb des Phagosoms oxidiert ROS Dihydroethidium zu 2-Hydroxyethidium, das die bakterielle DNA färbt und eine rote Fluoreszenz verleiht.
Führen Sie einen Quencher ein, um die extrazelluläre Fluoreszenz zu löschen.
Fügen Sie eine Lyselösung hinzu, um potenzielle RBC-Interferenzen zu eliminieren, und reparieren Sie die Leukozyten.
In der Durchflusszytometrie bestätigen Zellen mit grüner Fluoreszenz die phagoz
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