Ein In-vitro-Assay zur Messung der Serinproteaseaktivität von Neutrophilen unter Verwendung eines fluoreszierenden Reporters
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Immunologie
0 Aufrufe • 2:59 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Mikrotiterplatte mit neutrophilen Serinproteasen oder NSPs. Diese löslichen Enzyme mit proteolytischer Aktivität, die von Neutrophilen sezerniert werden, wirken bei Entzündungsreaktionen.
Fügen Sie fluoreszierende Reportersonden hinzu, die ein Erkennungsmotiv tragen, das als Spaltstelle für NSPs dient. Die Sonden sind an ein Donor- und ein Akzeptorfluorophor konjugiert.
Bei Anregung durch eine bestimmte Wellenlänge gibt das Donorfluorophor Energie ab. Aufgrund seiner Nähe zum Donor absorbiert das Akzeptorfluorophor die Energie und emittiert Fluoreszenz einer anderen Wellenlänge.
Erkennen Sie die Donor- und Akzeptorsignale getrennt und berechnen Sie das Donor-zu-Akzeptor-Verhältnis, um die NSP-Aktivität zu bewerten. Ein niedriges Verhältnis deutet auf eine Quenching der Donorfluoreszenz ohne Sondenspaltung hin.
Die NSPs erkennen und spalten das Erkennungsmotiv auf den Sonden, wodurch der Akzeptor freigegeben wird.
Der Abstand zum Akzeptor ermöglicht die Fluoreszenzemission aus dem Donorfluorophor, wodurch das Donor-zu-Akzeptor-Verhältnis erhöht wird. Ein hohes Verhältnis deutet auf eine effiziente Sondenspaltung durch die NSPs hin.
Tauen Sie Enzyme auf Eis auf und st
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