Messung der immuninduzierten Hemmung des Sämlingswachstums

Verpflanzen Sie Sämlinge in Vertiefungen, die die gewünschten Konzentrationen eines Immunauslöserpeptids enthalten – ein Proteinfragment, das aus pathogenassoziierten Molekülen gewonnen wird.

Dieses Peptid bindet an die Mustererkennungsrezeptoren (PRRs) auf den Pflanzenzellen und löst so eine Signalkaskade aus.

Diese Kaskade umfasst die Phosphorylierung von respiratorischen Burst-Oxidase-Homolog- oder RBOH-Proteinen, die enzymatisch aktiv werden und die Produktion von reaktiven Sauerstoffspezies oder ROS katalysieren.

ROS wirken als sekundäre Botenstoffe in Immunsignalwegen, verstärken die durch PRRs ausgelöste Abwehrreaktion und fungieren als direkte antimikrobielle Wirkstoffe, die das Wachstum von Krankheitserregern hemmen, indem sie ihre zellulären Bestandteile schädigen.

Während der ROS-Produktion stellt die Pflanze Energie und Nährstoffe zur Verfügung, um ihre Immunantwort zu unterstützen, und lenkt Ressourcen von wachstumsbedingten Prozessen ab, die zu einer Wachstumshemmung führen.

Bestimmen Sie die prozentuale Wachstumshemmung bei den mit Emiktoren behandelten Sämlingen im Vergleich zu unbehandelten Sämlingen, indem Sie ihre Frischgewichte korrelieren.

Steigende Konzentrationen von Peptid-Eliktoren hemmen das Wachstum der Sämlinge aufgrund erhöhter Immunantworten und damit verbundener biochemischer Veränderungen.

Vier Tage nach der Beendigung wird jede Vertiefung einer 48-Well-Platte mit 500 Mikrolitern MS-Medium befüllt, das mit einer Verdünnung des Elikatorpeptids ergänzt wurde. Als nächstes transplantieren Sie mit einer sterilen Pinzette vorsichtig sechs bis acht Sämlinge der gleichen Größe, des gleichen Alters und des gleichen Genotyps in jede Peptidverdünnung und achten Sie darauf, dass der Sämling nicht beschädigt oder die Wurzel gebrochen wird und dass die Wurzel in Medium getaucht wird.

Wenn alle Sämlinge plattiert sind, versiegeln Sie die Platten mit Mikroporenband und setzen Sie die Pflanzen für acht bis 12 Tage unter die üblichen Kurztagbedingungen. Um die prozentuale Wachstumshemmung zu bestimmen, machen Sie ein Foto, um die Wachstumshemmung visuell aufzuzeichnen, bevor Sie die Sämlinge vorsichtig aus jeder Vertiefung entfernen. Tupfe dann die Wurzeln zum Trocknen auf ein Papiertuch und wiege jeden Sämling auf einer Analysewaage

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