Identifizierung und Zählung von Immunzellen in bronchoalveolärer Lavageflüssigkeit mittels Durchflusszytometrie

Beginnen Sie mit einer Multiwell-Platte, die bronchoalveoläre Lavage-Flüssigkeit der Maus enthält, die eine Immunzellpopulation umfasst, die mit einem grün fluoreszierenden Viabilitätsfarbstoff gefärbt ist.

Führen Sie Fc-Antikörper ein, um die Fc-Rezeptoren der Immunzellen zu blockieren.

Fügen Sie einen Cocktail aus unterschiedlichen Fluorophor-markierten Antikörpern hinzu, die auf bestimmte Zellmarker abzielen. Entfernen Sie ungebundene Antikörper und resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer.

Identifizieren Sie mit Hilfe der Durchflusszytometrie schwache Fluoreszenz-Singuletts, die auf lebende Zellen hinweisen.

Beleuchten Sie Zellen bei 488 Nanometern, wodurch Zellen rote Fluoreszenz emittieren, die mit CD11c-exprimierenden Zellen korreliert.

Innerhalb der Population mit hohem CD11c-Gehalt können mit geeigneten Wellenlängenfiltern die Zellmarkerproteine MHC-II auf dendritischen Zellen und SiglecF auf Makrophagen identifiziert werden.

In der CD11c-niedrigen Population ermöglicht die Expression von CD3 auf T-Zellen und CD19 auf B-Zellen deren Identifizierung.

Beleuchten Sie Zellen in einer Tiefe von 405 Nanometern, die eine blaue Fluoreszenz emittieren, die die CD11b-exprimiere