JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 6:08 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Mykobakterien. Geben Sie steigende Konzentrationen von Testverbindungen in die Vertiefungen.
ausbrüten. Abhängig von der Wirkung der Verbindung auf Mykobakterien kann sie entweder das Wachstum von Mykobakterien hemmen und eine bakteriostatische Aktivität aufweisen, oder Mykobakterien eliminieren, die eine bakterizide Aktivität zeigen.
Übertragen Sie die Well-Aliquots in einen Aktivkohle-Agar-Resazurin-Assay (CARA), eine Mikrotiterplatte, die Agar mit Aktivkohle enthält, um die Testverbindung zu absorbieren und Verschleppungseffekte zu vermeiden.
ausbrüten. Die bakteriostatische Aktivität der Verbindung hemmt die mykobakterielle Replikation, während die bakterizide Aktivität die Lebensfähigkeit der Mykobakterien verringert.
Fügen Sie Puffer, Resazurin und ein nichtionisches Tensid hinzu, um Resazurin in den Vertiefungen zu dispergieren.
Bei den stoffwechselaktiven Mykobakterien reduzieren die Dehydrogenasen das bläulich gefärbte, schwach fluoreszierende Resazurin zu einem rosafarbenen, fluoreszierenden Resorufin.
Messen Sie mit einem Mikroplatten-Reader die Resorufin-Fluoreszenz in den Wells.
Vertiefungen ohne Resorufin-Fluoreszenz weisen auf di
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