Lokalisierte Oberflächenplasmonen-Resonanztomographie zum Nachweis von Proteinsekreten aus einer einzelnen Zelle
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 5:00 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem Glassensorchip mit funktionalisierten nanostrukturierten Gold-Arrays mit einer selbstorganisierten Monoschicht, die Carboxylgruppen enthält.
Befestigen Sie den Chip in einer mikrofluidischen Anordnung und führen Sie einen Linker ein, um die Carboxylgruppen zu aktivieren.
Fügen Sie Peptidliganden hinzu, die über Linker mit den aktivierten Carboxylgruppen konjugieren.
Mit einem Deaktivator-Compound-haltigen Puffer behandeln, unspezifische Bindungsstellen deaktivieren und mit einem Puffer waschen.
Fokussieren Sie ein polarisiertes Licht auf den Chip. Mit einem lokalisierten Oberflächenplasmonen-Resonanztomographie-System erhalten Sie ein Bild der Arrays, das als helle Quadrate vor einem dunklen Hintergrund erscheint.
Beim Resonanzwinkel absorbieren die Goldelektronen das Licht. Messen Sie die Intensität des reflektierten Lichts im entsprechenden Winkel, um die Sensorreaktion zu erzeugen.
Führen Sie proteinsezernierende Hybridomzellen ein, die an den Chip binden und waschen.
Die angehängten Zellen sezernieren Proteine, die mit den Liganden auf dem nahe gelegenen Array interagieren.
Diese Wechselwirkungen verändern den Winkel und die Intensität des reflektierten L
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