Ein In-vitro-Assay zur Untersuchung der Antikörper-abhängigen Verstärkung einer Virusinfektion
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Immunologie
0 Aufrufe • 5:35 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Mikroplatte mit seriellen Verdünnungen einer Serumprobe, die Antikörper gegen das Zika-Virus enthält.
Fügen Sie Dengue-Reporterviruspartikel oder RVPs hinzu und inkubieren Sie.
Die technisch hergestellten RVPs bestehen aus einer Hülle mit Strukturproteinen und einem Nukleokapsid, das genomische RNA enthält und für ein fluoreszierendes Protein kodiert.
Die strukturelle Homologie der Hüllproteine der Dengue- und Zika-Viren bewirkt, dass die Antikörper mit den RVPs kreuzreagieren und einen Komplex bilden.
Fügen Sie menschliche Leukämiezellen hinzu, die für eine Infektion durch RVPs unzulässig sind.
Die Zellen besitzen Fc-Rezeptoren, die die RVP-gebundenen Antikörper erkennen und den Eintritt von RVPs in die Endosomen erleichtern – die sogenannte antikörperabhängige Verstärkung oder ADE.
Pelletieren Sie die Zellen und entsorgen Sie den Überstand mit den nicht internalisierten RVPs. Fügen Sie ein Wachstumsmedium hinzu und inkubieren Sie.
Die pH-abhängige Fusion von RVP und endosomalen Membranen setzt das Nukleokapsid frei, das sich zersetzt, um genomische RNA freizusetzen, was die Expression fluoreszierender Proteine ermöglicht.
Fixieren Sie die Zellen und analysieren Si
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