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Immunologie
0 Aufrufe • 3:53 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit verschiedenen Reportermakrophagen, die das sekretierte embryonale alkalische Phosphatase-Gen (SEAP) oder ein sezerniertes Luciferase-Gen unter induzierbaren Promotoren beherbergen.
Medien, die verschiedene Peptid-Gold-Nanopartikel-Hybride enthalten, die mit Lipopolysacchariden oder LPS gemischt sind, sind in die dafür vorgesehenen Vertiefungen zu geben.
LPS bindet an Makrophagen-Toll-like-Rezeptoren (TLR) und löst die Internalisierung in das Endosom aus.
Die endosomale Protonenpumpe transportiert Protonen im Inneren. Die Versauerung löst die TLR-Signalgebung aus und aktiviert so Transkriptionsfaktoren.
Diese Faktoren induzieren die Expression der Reportergene und produzieren SEAP oder Luciferase.
Alternativ bewirkt die Internalisierung von LPS zusammen mit den Hybriden, dass die negativ geladenen Peptidgruppen luminale Protonen sequestrieren, wodurch eine endosomale Ansäuerung verhindert und die TLR-Signalübertragung gehemmt wird.
Sammeln Sie das Medium, zentrifugieren Sie, um den Überstand zu trennen, und fügen Sie Substrate für SEAP und Luciferase hinzu.
SEAP wandelt sein Substrat in ein farbiges Produkt um, während Luciferase sein Substrat ka
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