Ein fokusbildender Assay zur Quantifizierung von Virustitern in den Organen einer infizierten Maus

Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die eine Monoschicht aus Säugetierzellen enthält.

Beimpfen Sie die Vertiefungen mit seriellen Verdünnungen von Gewebehomogenaten, die das Zika-Virus enthalten und aus verschiedenen Organen einer infizierten Maus stammen.

Beim Eintritt in die Zellen über die Endozytose vermehrt sich das Virus und knospt ab, um benachbarte Zellen zu infizieren.

Mit einer hochviskosen Methylcelluloselösung überziehen, wodurch eine physikalische Barriere entsteht, die die Virusbewegung einschränkt.

Die Barriere erlaubt nur die Infektion unmittelbarer Nachbarzellen, wodurch sich Herde infizierter Zellen bilden, und stellt sicher, dass jeder Fokus von einem einzigen Viruspartikel stammt, was eine genaue Quantifizierung ermöglicht.

Fixieren Sie die Zellen und permeabilisieren Sie die Membran. Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die in die Zellen eindringen und mit dem viralen Antigen interagieren.

Führen Sie einen Peroxidase-konjugierten Sekundärantikörper ein, der an den Primärantikörper bindet.

Fügen Sie ein chromogenes Substrat hinzu, das durch Peroxidase umgewandelt wird, um farbige Flecken zu erzeugen, die auf die Herde infizierter Zellen hinweisen.

Zählen Sie die He