JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:29 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie zwei Mikrotiterplatten mit Deckgläsern mit Makrophagen oder BMMs aus dem Knochenmark.
Fügen Sie die metazyklischen Promastigoten von Leishmania – das längliche gegeißelte Stadium – in eine Platte und Amastigotes – das ovale, nicht gegeißelte Stadium – in eine andere Platte hinzu.
Während der Inkubation binden die Parasiten an Makrophagenrezeptoren und lösen so die Rezeptor-vermittelte Phagozytose aus.
Das Phagosom verschmilzt mit den Lysosomen und Vesikel, die aus dem endoplasmatischen Retikulum und dem Golgi-Apparat stammen, und reift zu einer parasitophoren Vakuole.
Der verringerte pH-Wert der Vakuole löst die Differenzierung der Promastigoten in Amastigot und deren Replikation aus.
Waschen, um nicht internalisierte Parasiten zu entfernen.
Fixieren Sie die infizierten Makrophagen und fügen Sie Reinigungsmittel hinzu, um die Zellen und Parasiten zu permeabilisieren.
Führen Sie einen fluoreszierenden Nukleinsäurefarbstoff ein, um die Makrophagen- und Parasitenkerne zu färben.
Montieren Sie die Deckgläser auf Objektträger und beobachten Sie sie unter einem Fluoreszenzmikroskop, wobei Sie die größeren Wirtskerne und die umgebenden kleineren Amastigotenkerne quantifizieren.
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