JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:20 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die serielle Verdünnungen der Testverbindung, eines Aminoglykosid-Antibiotikums, enthält.
Geben Sie eine Suspension von Mycobacterium tuberculosis – einem pathogenen Bakterium – in die Vertiefungen und inkubieren Sie.
Im Zytoplasma bindet die Testsubstanz an die mykobakterielle ribosomale 30S-Untereinheit, hemmt die normale Proteinsynthese und führt schließlich zum Tod der Mykobakterien.
Fügen Sie den Kulturen nach der Inkubation Resazurin hinzu – einen schwach fluoreszierenden wasserlöslichen Farbstoff. Ausbrüten.
In lebensfähigen metabolisch aktiven Mykobakterien reduzieren Dehydrogenase-Enzyme blau gefärbtes Resazurin zu einem rosa fluoreszierenden Resorufin.
Messen Sie mit einem Fluoreszenzplatten-Reader die Resorufin-Fluoreszenzintensität in den Wells.
Ein niedriger Fluoreszenzintensitätswert mit steigenden Konzentrationen der Prüfsubstanz deutet auf eine zytotoxische Wirkung gegen die Mykobakterien hin.
Um einen Resazurin-Assay durchzuführen, züchten Sie M. tuberculosis in der 7H9ADST bis zur mittleren logarithmischen Phase. Verdünnen Sie die Kultur mit 7H9ADST auf einen OD600 von 0,01. Verwenden Sie 7H9ADST, um die Verbindungen auf das Doppe
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