Messung der TEER in röntgenbestrahlten Epithelzellen, die mit PBMCs kokultiviert wurden

Nehmen Sie einen Membraneinsatz, der eine röntgenbestrahlte Epithel-Monoschicht enthält.

Platzieren Sie den Membraneinsatz in einer Vertiefung, in der sich mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) befinden – Immunzellen, die Zytokine und andere Signalmoleküle ausschütten.

Platzieren Sie den transepithelialen elektrischen Widerstand oder die TEER-Elektroden in den Membraneinsatz.

Legen Sie einen kleinen elektrischen Strom an und messen Sie den Widerstand, um die Permeabilität der Monoschicht zu beurteilen, die durch Tight Junctions reguliert wird.

Tight Junctions sind Transmembranproteine, die über Gerüstproteine mit dem Zytoskelett verbunden sind.

Zusammen bilden diese Verbindungsproteine eine robuste Barriere zwischen den Zellmembranen und schränken den Durchgang großer Moleküle und Krankheitserreger ein.

Intakte Übergangsproteine behindern den elektrischen Stromfluss, was zu einer hohen TEER führt, was auf eine normale Monolayer-Permeabilität hinweist.

Die Röntgenstrahlenexposition reduziert den Gehalt an junktionalen Proteinen, erhöht die Permeabilität der Monolagen und senkt die TEER.

Darüber hinaus aktivieren Signalmoleküle aus bestrahlten Zellen co-kultivierte PBMCs, die Zytokine freisetzen, was zu einer weiteren Verringerung der Spiegel an junktionalen Proteinen führt und die Integrität der Barriere stört.

Folglich nimmt die Permeabilität der Monoschicht zu, was zu einer weiteren Abnahme der TEER führt.

Um den transepithelialen elektrischen Widerstand (TEER) der Caco-2-Zellen unmittelbar nach der Bestrahlung zu beurteilen, überführen Sie die Hälfte der Caco-2-Zellkultureinsätze in eine neue Platte mit 3 Millilitern frischem vollständigem Medium in jeder Vertiefung und die Hälfte der Einsatzkulturen in eine neue Platte, die mit 2 x 10⁶ PBMC pro 3 Milliliter vollständigem Medium pro Vertiefung besiedelt ist. Platzieren Sie dann in den ersten sechs Stunden stündlich und dann alle drei Stunden bis 48 Stunden nach der Bestrahlung eine TEER-Essstäbchenelektrode in den Zellkultureinsatz.