Immunhistochemie zur Untersuchung der Beziehung zwischen Makrophagen und infiltrierten Immunzellen

Beginnen Sie mit einem Objektträger mit Formalin-fixierten, deparaffinisierten und rehydrierten Biopsieabschnitten der Schläfenarterie mit infiltrierten Immunzellen, einschließlich Lymphozyten und Makrophagen.

Aktivierte Makrophagen exprimieren den Folatrezeptor beta oder FR-β – einen krankheitsbezogenen Marker, der die Makrophagen von anderen Immunzellen unterscheidet.

Übertragen Sie den Objektträger in einen vorgewärmten Puffer, um Oberflächenrezeptoren zu gewinnen.

Behandeln Sie den Schnitt mit Wasserstoffperoxid, wodurch die intrazelluläre Peroxidaseaktivität blockiert wird.

Einführung einer Mischung aus primären Antikörpern, die auf CD3, CD68 und FR-β abzielen und an Immunzellen binden, die diese Proteine exprimieren.

Biotinylierte Sekundärantikörper hinzufügen, die mit Primärantikörpern interagieren, und waschen.

Überlagerung mit Streptavidin-konjugierten Enzymen, die an Biotin binden.

Behandeln Sie mit einem chromogenen Substrat, das mit Enzymen interagiert und lokalisierte braune Ausfällungen erzeugt.

Führen Sie eine Gegenfärbung ein – Hämatoxylin, die die Zellkerne blau färbt.

Mikroskopisch identifizieren Sie kleine, runde, braun gefärbte Zellen als CD3-exprimierende Lymph