Ein Assay für die Zellzyklusanalyse von antigenspezifischen CD8+ T-Zellen
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Immunologie
0 Aufrufe • 6:20 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie sekundäre lymphoide Organzellen einer antigenimmunisierten Maus, die antigenspezifische CD8+ T-Zellen in verschiedenen Zellzyklusstadien enthalten.
G1, S, G2 und M sind Stadien aktiv teilender Zellen, während Zellen im G0-Stadium ruhen
.Fügen Sie einen fluoreszierenden Viabilitätsfarbstoff hinzu, um tote Zellen zu markieren, und Fluorophor-markierte Antikörper, die an die T-Zell-Oberflächenmarker CD3 und CD8 binden.
Einführung von Fluorophor-konjugierten antigenen Peptid-MHC-Multimeren zur Bindung von T-Zell-Rezeptoren und zur Markierung der antigenspezifischen T-Zellen.
Fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen mit einem Puffer.
Führen Sie Fluorophor-markierte Antikörper ein, um ein Zellproliferations-assoziiertes Kernprotein zu binden und die sich aktiv teilenden Zellen zu färben.
Füge einen Fluoreszenzfleck hinzu, um die DNA zu markieren.
Mittels Durchflusszytometrie werden die lebenden Zellen selektiert und die antigenspezifischen CD8+ T-Zellen über die oberflächengebundenen Markierungen identifiziert.
Die Intensität der DNA-Färbung unterscheidetG0- undG1-Zellen mit einer niedrigeren DNA-Menge von den S-,G2- und M-Zellen mit einer höheren DNA-Menge. Das Fehlen des
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