Messung der Mikrogliaaufnahme von intravitreal abgegebenen fluoreszierenden Partikeln mittels Durchflusszytometrie

Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die eine Einzelzellsuspension von myeloischen Zellen der Maus-Netzhaut, einschließlich Mikroglia, Monozyten und Neutrophilen, enthält.

Mikroglia – oder phagozytäre Immunzellen der Netzhaut – weisen eine Fluoreszenz auf, die auf verschlungene, mit Fluorophoren markierte Biopartikel pilzlichen Ursprungs zurückzuführen ist, die intravitreal vorinjiziert werden.

Zentrifugieren und fügen Sie Fc-Rezeptor-Antikörper hinzu, um unspezifische Interaktionsstellen zu blockieren."

Einführung eines Cocktails aus Fluorophor-markierten Antikörpern, die auf CD11b-, Ly6C- und Ly6G-Oberflächenproteine abzielen und mit myeloischen Zellen interagieren, die diese exprimieren.

Entfernen Sie ungebundene Antikörper. Behandeln Sie mit Propidiumiodid, das durch geschädigte Membranen dringt und ausschließlich abgestorbene Zellen färbt.

In der Durchflusszytometrie wird Propidiumiodid angeregt, um tote Zellen auszuschließen und die nicht fluoreszierenden lebenden Zellen zu identifizieren.

Beleuchten Sie die Zellen mit einem violetten Laser; angeregte lebende Zellen stehen für die CD11b-exprimierenden myeloischen Zellen.

Als nächstes wird das Licht mit einem roten Laser