JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:57 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie mononukleäre Zellen des peripheren Blutes oder PBMCs, eine gemischtzellige Population, die Lymphozyten und Monozyten umfasst.
Fügen Sie einen fluoreszierenden Viabilitätsfarbstoff hinzu, um tote Zellen zu unterscheiden, und einen fluoreszenzmarkierten Antikörper-Cocktail zur Identifizierung verschiedener Zelltypen.
Die Fluorochrom A-konjugierten Antikörper binden an Oberflächenmarker – CD3 auf T-Zellen, γδ T-Zellrezeptor oder TCR auf γδ T-Zellen und CD56 auf natürlichen Killer- oder NK-Zellen.
Die Fluorochrom B-konjugierten Antikörper binden an CD4 und CD8 auf T-Zellen, CD19 auf B-Zellen und CD14 auf Monozyten.
Identifizieren Sie mit Hilfe der Durchflusszytometrie die Untergruppen lebender Zellen.
Während CD8+- und CD4+-T-Zellen CD3+ sind, liegen CD4+-Zellen zwischen CD3-einfach-positiven und CD3-CD8-doppelt-positiven Zellen.
γδ T-Zellen exprimieren γδ TCRs und höhere CD3 im Vergleich zu CD4+ und CD8+ Zellen.
B-Zellen und NK-Zellen sind CD3-, werden aber durch CD19 auf B-Zellen und CD56 auf NK-Zellen identifiziert.
Monozyten werden durch CD14-Expression identifiziert.
Um die PBMCs für die Färbung vorzubereiten, geben Sie 100 Mikroliter jeder Probe auf eine 96-Well-V-Bode
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