Ein CFSE-basierter Assay zur Überwachung der Migration dendritischer Zellen der Haut zu drainierenden Lymphknoten bei infizierten Mäusen
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Immunologie
0 Aufrufe • 4:34 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine betäubte Maus. Mycobacterium bovis BCG-Suspension in den hinteren Fußballen injizieren.
Dendritische Zellen der Haut erkennen und phagozytieren die Mykobakterien.
Weiterhin werden die prozessierten mykobakteriellen Komponenten auf MHC-Klasse-II-Molekülen präsentiert.
Injizieren Sie den zellpermeablen CFSE-Farbstoff in dasselbe Fußpolster.
Intrazelluläre Esterasen spalten CFSE zu einem zellundurchlässigen Fluoreszenzprodukt und färben die Zellen an
.Darüber hinaus wandern aktivierte dendritische Zellen über lymphatische Gefäße zum Kniekehlenlymphknoten und aktivieren so T-Zellen.
Den Kniekehle-Lymphknoten chirurgisch herausschneiden und durch ein Sieb homogenisieren, um eine einzellige Suspension zu erhalten.
Zentrifugieren Sie die Zellen und resuspendieren Sie sie in einem Puffer.
Übertragen Sie die Zellen in ein Durchflusszytometrie-Röhrchen. Zentrifugieren Sie die Zellen und behandeln Sie sie mit einem Antikörper-Cocktail.
Fc-blockierende Antikörper blockieren Fc-Rezeptoren, während Fluorophor-markierte Antikörper an die Oberflächenmarker CD11c und MHC Klasse-II-Moleküle auf Immunzellen binden.
Identifizieren Sie mittels Durchflusszytometrie die CFSE-markierten de
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