JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:22 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer glasbasierten Bildgebungsschale, die eine Suspension menschlicher Neutrophilen – oder Immunzellen – enthält, und visualisieren Sie sie unter einem Fluoreszenzbildgebungssystem.
Führen Sie genetisch veränderte fluoreszierende Aspergillus-Reporterkonidien – oder Pilzsporen – ein und nehmen Sie Bilder in regelmäßigen Abständen von bis zu 6 Stunden auf.
Die Pilzsporen exprimieren rot fluoreszierende Proteine und sind extern mit nicht abbaubaren magentafarbenen Fluorophoren markiert – was hilft, tote Zellen von lebenden Zellen zu unterscheiden.
Während der Inkubation interagieren Neutrophile über Mustererkennungsrezeptoren mit pathogenassoziierten Molekülen auf Konidien und erleichtern so deren Einlagerung in ein Phagosom.
Später verschmilzt das Phagosom mit dem enzymhaltigen Lysosom zu einem Phagolysosom.
Im Inneren des Phagolysosoms bauen die reaktiven Sauerstoffspezies und Enzyme Konidien ab.
Während der Bildgebung von lebenden Zellen deutet eine intensive rote und magentafarbene Fluoreszenz im Phagosom von Neutrophilen zum ersten Zeitpunkt auf das Vorhandensein von lebenden Konidien hin.
Im Laufe der Zeit deutet eine Abnahme der roten Fluoreszenz unter Beibeha
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