Verwendung von Bead-gestützten Lipiddoppelschichten zur Untersuchung der synaptischen Ausgabe von T-Zellen

Nehmen wir zum Beispiel bead-gestützte Lipid-Doppelschichten oder BSLBs, Kieselsäurekügelchen, die mit Lipid-Doppelschichten beschichtet sind, die mit antigenen Peptid-MHC-Komplexen, Adhäsions- und co-stimulatorischen Molekülen konjugiert sind und als synthetische antigenpräsentierende Zellen wirken.

Inkubieren Sie mit T-Zellen.

TCRs binden an antigene Peptide auf BSLBs, die zusammen mit co-stimulatorischen Signalen eine Immunsynapse bilden, die T-Zellen aktiviert.

Diese Bindung löst intrazelluläre Signalkaskaden aus, die eine Aktin-Umlagerung induzieren und Mikrocluster an der Synapse bilden, die Adhäsions- und Signalmoleküle enthalten.

T-Zellen geben transsynaptische Vesikel ab, die mit TCRs, co-stimulatorischen Molekülen und lytischen Granulainhalten angereichert sind, in die Synapse und binden an BSLBs.

Kühlen Sie die Co-Kultur allmählich ab, um BSLBs von T-Zellen zu trennen.

Zentrifugieren und den Überstand verwerfen. Verwenden Sie einen proteinhaltigen Puffer, um die freien Bindungsstellen auf den Oberflächen zu blockieren.

Zentrifugieren und behandeln Sie BSLBs und T-Zellen mit Fluorophor-konjugierten Antikörpern, die an spezifische Signal- und Co-stimulatorische Moleküle bi