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Immunologie
0 Aufrufe • 6:27 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Kultur von Makrophagen aus dem Knochenmark. Entfernen Sie das Medium und fügen Sie Salmonellenbakterien hinzu, die ein fluoreszierendes zytoplasmatisches Protein exprimieren.
Zentrifugieren, um den Kontakt zwischen Bakterien und Makrophagen zu erleichtern, und inkubieren.
Die Bakterien binden an Makrophagenrezeptoren und erleichtern so die Internalisierung in einem Phagosom.
Das Phagosom fusioniert mit Endosomen-abgeleiteten Vesikel, und gleichzeitig sezernieren die Bakterien Effektoren, wodurch das Phagosom in eine Salmonellen-haltige Vakuole oder SCV umgewandelt wird.
Eine Untergruppe von SCVs reißt und setzt internalisierte Bakterien in das Zytoplasma frei.
Fügen Sie ein Antibiotikum hinzu, um nicht internalisierte Bakterien zu eliminieren. Aspirieren Sie das Medium, das abgestorbene Bakterien enthält.
Führen Sie einen Puffer ein, der das Detergens Digitonin enthält, das an Cholesterin bindet.
Die Bindung von Digitonin an die cholesterinreiche Plasmamembran führt zu einer Porenbildung, während die cholesterinarme SCV-Membran intakt bleibt – ein Phänomen, das als differentielle Permeabilisierung bezeichnet wird.
Fügen Sie fluoreszenzmarkierte Antikörper hinzu, die
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