In-vitro-Messung der Aktivität von α-Galactosidase A und sauren α-Glucosidase-Enzymen

α-Galactosidase A und saure α-Glucosidase sind lysosomale Enzyme, die für den Zellstoffwechsel entscheidend sind.

α-Galactosidase A baut Substrate wie Glykolipide ab, während saure α-Glucosidase Glykogen hydrolysiert.

Um ihre Enzymaktivität in vitro zu messen, nehmen Sie Multi-Well-Plattenvertiefungen mit Proben, die bekannte Konzentrationen von α-Galactosidase A bzw. Säure α-Glucosidase enthalten.

Geben Sie das erforderliche Volumen an sauren Lösungen von synthetischen 4-Methylumbelliferyl-Substraten in die Vertiefungen, spezifische fluorogene Substrate, die so konzipiert sind, dass sie natürliche Substrate für diese Enzyme nachahmen.

Im Dunkeln inkubieren.

α-Galactosidase A und saure α-Glucosidase-Enzyme spalten ihre jeweiligen Substrate und setzen das Fluoreszenzprodukt 4-Methylumbelliferon frei.

Fügen Sie einen alkalischen Puffer hinzu, um die enzymatische Reaktion zu beenden.

Messen Sie mit einem Mikroplatten-Fluoreszenz-Reader die Fluoreszenzintensität des 4-Methylumbelliferons in den Vertiefungen, die auf seine Konzentration hinweist, um die Aktivität des α-Galactosidase A bzw. des sauren α-Glucosidase-Enzyms zu bestimmen.

Verdünnen Sie die berechnete Menge jeder Probe und p