Ein Virus-Attachment-Assay für das Screening von antiviralen Verbindungen
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:47 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die eine vorgekühlte Monoschicht menschlicher Hepatomzellen enthält.
Behandeln Sie die Testvertiefungen mit einer Mischung aus genetisch veränderten Hepatitis-C-Viren, die das Luciferase-Gen tragen, und einer Zielverbindung; behandeln Sie die Kontrollvertiefungen nur mit dem Virus.
In den Testvertiefungen interagieren Zielmoleküle mit viralen Glykoproteinen und Zelloberflächenrezeptoren und verhindern so die Anheftung von Viren.
In Kontrollwells interagieren virale Glykoproteine jedoch mit Rezeptoren auf der Zelloberfläche und ermöglichen deren Anheftung. Eine niedrige Temperatur hemmt den Eintritt von Viren.
Entfernen Sie den Überstand, führen Sie ein Medium ein und inkubieren Sie es erneut bei der optimalen Temperatur, um den Eintritt des Virus zu erleichtern.
Beim Eintritt setzt das Virus das genetische Material frei und initiiert die Synthese von viralen Proteinen und Luciferase-Enzymen, die in das Medium sezerniert werden.
Übertragen Sie den Luciferase-haltigen Überstand und führen Sie ein Substrat ein.
Die Enzym-Substrat-Wechselwirkung erzeugt Licht im Verhältnis zum Luciferase-Spiegel.
Die geringere Lichtintensität in den Testvertief
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