JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:38 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie Leberkrebszellen und inkubieren Sie sie bei niedriger Temperatur, um die Endozytose zu beeinträchtigen.
Einführung eines rekombinanten Hepatitis-C-Virus oder HCV, das aus einem manipulierten RNA-Genom besteht, das für einen sezernierten Luciferase-Reporter kodiert.
Die viralen Lipoproteine interagieren mit den Proteoglykanen auf den Wirtszellen, während die viralen Hüllglykoproteine an spezifische Wirtsrezeptoren binden.
Fügen Sie in ausgewählten Vertiefungen die Testverbindung hinzu, die an virale Glykoproteine bindet.
Nach der Inkubation bei physiologischer Temperatur werden die gebundenen Viren endozytiert.
Verwerfen Sie die nicht internalisierten Viren, fügen Sie ein Wachstumsmedium hinzu und inkubieren Sie.
In den unbehandelten Vertiefungen unterstützen die Glykoproteine die virale Hüllkurven-Endosomen-Fusion und setzen das Nukleokapsid frei, während die Maskierung der Verbindung die Fusion in den behandelten Vertiefungen beeinträchtigt.
Bei der Freisetzung exprimiert die RNA virale Proteine, einschließlich Luciferase, die extrazellulär sezerniert wird.
Ernten Sie den luciferasehaltigen Überstand und fügen Sie ein biolumineszierendes Substrat hinzu, das durch Lucife
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