JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:10 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie Vertiefungen mit Polyacrylamid-Hydrogelen unterschiedlicher Steifigkeit, die mit Kollagen überzogen sind und eine physiologische extrazelluläre Matrix oder EZM nachahmen.
Fügen Sie mikrovaskuläre Endothelzellen hinzu, die fokale Adhäsionen oder FAs bilden - Komplexe, die die Zell-EZM-Bindung vermitteln -, um die Steifigkeit des Hydrogels zu erfassen.
Steifere Hydrogele erhöhen die Expression von Vimentin, einer Komponente des Zytoskeletts, auf der Zelloberfläche im Vergleich zu weicheren Hydrogelen.
Fügen Sie Listeria monocytogenes-Bakterien hinzu, die so entwickelt wurden, dass sie ein fluoreszierendes Protein unter dem Promotor für das Aktin-Assemblierungs-induzierende Protein (ActA) exprimieren.
Zentrifugieren, um den bakteriellen Kontakt mit den Wirtszellen zu synchronisieren, und inkubieren.
Die Bakterien binden an Vimentin. Mehr Vimentin auf den steiferen, an Hydrogel gebundenen Wirtszellen führt zu mehr bakterieller Adhärenz und Endozytose.
Fügen Sie ein Antibiotikum hinzu, um nicht internalisierte Bakterien zu eliminieren.
Die internalisierten Bakterien scheiden Giftstoffe aus und reißen die Endosomenmembran auf. Das zytoplasmatische Entweichen aktiviert den ActA
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