JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:24 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit adhärenten Monoschichten menschlicher Endothelzellen auf kollagenbeschichteten Polyacrylamid-Hydrogelen unterschiedlicher Steifigkeit.
Zellen auf steiferen Hydrogelen durchlaufen im Vergleich zu weicheren Hydrogelen eine signifikante Reorganisation des Zytoskeletts, wodurch die intrazelluläre Spannung steigt.
Waschen Sie die Zellen mit Medien und fügen Sie gentechnisch veränderte Listeria monocytogenes hinzu – die Expression eines fluoreszierenden Proteins unter dem Promotor des Actin-Assemblierungs-induzierenden Proteins (ActA).
Zentrifuge, um den Kontakt zwischen Zellen und Bakterien zu erleichtern. Inkubieren, um die bakterielle Endozytose zu vermitteln.
Mit Medien waschen. Mit Gentamicin behandeln, um nicht internalisierte Bakterien zu eliminieren. Ausbrüten.
Internatisierte Bakterien setzen porenbildende Toxine frei, die die phagosomalen Membranen stören. Zytosolische Bakterien regulieren die Expression von ActA und fluoreszierenden Proteinen hoch und markieren intrazelluläre Bakterien.
ActA-Proteine induzieren die Aktinpolymerisation und bilden einen Aktin-Kometenschweif, der die Bakterien vorantreibt, die Internalisierung durch benachbar
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